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熒光顯微鏡的光學(xué)系統(tǒng)必須完成兩個主要功能
2012-07-23
熒光的光學(xué)系統(tǒng)必須完成兩個主要功能：
(1)要有效的激發(fā)試樣中熒光反應(yīng)物，使用的發(fā)射波長最好接近它的吸收峰：
(2)必須盡可能呢個多的收集發(fā)出的熒光，以便使顯微鏡內(nèi)可見度最合適。
熒光光學(xué)系統(tǒng)的成象質(zhì)量主要取決于象的襯度和象的亮度，象的襯度是由樣品中激發(fā)出的熒光于背景上觀察到的光之比決定的。背景光包括透過阻擋激發(fā)光的濾色片的雜散激發(fā)光，樣品組織成分的自發(fā)熒光和光學(xué)系統(tǒng)的自發(fā)熒光和雜散光，熒光顯微術(shù)中盡全力要解決的是一方面獲得最佳的象襯度，同時又維持象有足夠亮度，這兩者往往是矛盾的。例如用極窄波帶濾色片激發(fā)時僅利用了極少的光能，背景暗了但熒光亮度也弱了。在應(yīng)用時，只能兼顧，合理的權(quán)衡以決定取舍。
熒光顯微鏡光學(xué)系統(tǒng)需要優(yōu)先考慮的是：
1. 光學(xué)系統(tǒng)造成的材料應(yīng)選用在激發(fā)光波內(nèi)無熒光材料，不但指光學(xué)系統(tǒng)玻璃也包括膠合制造中的膠合劑、切片、蓋玻片和浸液以及密封劑。若有自發(fā)熒光時，被單增加背景光，有時還會混擾觀察熒光圖象。
2. 光學(xué)系統(tǒng)的參數(shù)選擇中，應(yīng)將獲得最大光能作為第一考慮因素。
如照明系統(tǒng)中集光鏡應(yīng)選用最大的包容角;采用科勒照明并使燈絲或弧光象充滿入瞳.....以期望獲得高效率的均勻照明。
如收集熒光成像的物鏡，因為象面照度與數(shù)值孔徑成正比，為此作為熒光用物鏡應(yīng)有較大的值。
如雙目鏡筒作為熒光用時應(yīng)在可見光譜段有較高的透過率，采用鍍膜技術(shù)可大大地減少光能的損失，它可比一般雙目鏡筒透過率提高一倍，這對弱熒光物質(zhì)觀察是必需的。
3. 作為熒光光學(xué)系統(tǒng)各組成部件的光譜特性也是至關(guān)重要的，特別紫外光要通過的部件如照明系統(tǒng)，聚光鏡以及物鏡，就要關(guān)注紫光區(qū)的透射系數(shù)。如聚光鏡材質(zhì)要選用透紫外線制造。如照明系統(tǒng)中反光鏡轉(zhuǎn)折光路時，表面鍍鋁比鍍銀好，因為鋁的反射率在90%以上，而銀僅達(dá)70%
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